Vidéo: Quel est le but de la purification du produit PCR ?
2024 Auteur: Miles Stephen | [email protected]. Dernière modifié: 2023-12-15 23:36
Purification d'ADN d'un PCR La réaction est généralement nécessaire pour une utilisation en aval et facilite l'élimination des enzymes, des nucléotides, des amorces et des composants du tampon. Traditionnellement, cela était accompli en utilisant des méthodes d'extraction organiques, telles que l'extraction au phénol et au chloroforme, suivie d'une précipitation à l'éthanol.
La question est également, pourquoi est-il nécessaire de purifier les produits PCR ?
Vous devez purifier les produits PCR se débarrasser des amorces, nucléotides et enzymes inutilisés afin d'optimiser le succès de la ligature, qui maintiendra et séquencera le produit de PCR . À purifier les Produits PCR , une chromatographie d'exclusion stérique est utilisée.
De plus, que dois-je faire après la PCR ? Pour maximiser la récupération, rincez la coupelle de rétentat deux fois avec 10 à 20 µL de TE ou d'eau. Le final PCR La réaction peut contenir jusqu'à un microgramme d'ADN amplifié qui peut être utilisé pour une variété d'applications de biologie moléculaire. Ces applications peuvent être plus ou moins sensibles aux composants résiduels du PCR mélange réactionnel.
On peut aussi se demander, comment nettoyez-vous les produits PCR ?
Les méthodes classiques utilisées pour nettoyer en haut Produits PCR avant le séquençage comprennent l'électrophorèse sur gel, la précipitation à l'éthanol et la chromatographie sur colonne. Bien qu'assez efficaces, ces méthodes peuvent rapidement devenir lourdes lors du traitement de plusieurs échantillons en parallèle et présenter divers degrés de perte d'échantillon.
Pourquoi l'ADN doit-il être nettoyé ?
Nous nettoyer en haut ADN à partir de solutions aqueuses pour éliminer les sels tampons, les enzymes ou d'autres substances qui pourraient affecter les applications en aval. Les exemples incluent la réaction PCR nettoyer en haut, nettoyer après les digestions de restriction et nettoyer up de génomique ou plasmidique ADN contaminés par des protéines/débris cellulaires.
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