Comment la concentration d'ADN est-elle calculée à l'aide d'un spectrophotomètre ?
Comment la concentration d'ADN est-elle calculée à l'aide d'un spectrophotomètre ?

Vidéo: Comment la concentration d'ADN est-elle calculée à l'aide d'un spectrophotomètre ?

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Vidéo: Mesurer des absorbances avec un spectrophotomètre 2024, Mars
Anonim

Concentration d'ADN est Estimé par mesurer l'absorbance à 260 nm, ajuster le A260 mesure de la turbidité ( mesuré par absorbance à 320 nm), multipliant par le facteur de dilution, et à l'aide de la relation qu'un A260 de 1,0 = 50 ug/ml d'ADNdb pur.

Les gens demandent également, comment trouvez-vous la concentration et la pureté de l'ADN ?

Évaluer pureté de l'ADN , mesurez l'absorbance de 230 nm à 320 nm pour détecter d'autres contaminants possibles. Le plus commun calcul de pureté est le rapport de l'absorbance à 260 nm divisé par la lecture à 280 nm. Bonne qualité ADN aura un A260/UNE280 rapport de 1,7 à 2,0.

De même, qu'est-ce qu'une bonne concentration d'ADN ? UNE bon qualité ADN l'échantillon doit avoir un A260/UNE280 ratio de 1,7-2,0 et un A260/UNE230 rapport supérieur à 1,5, mais étant donné que la sensibilité des différentes techniques à ces contaminants varie, ces valeurs ne doivent être prises qu'à titre indicatif pour la pureté de votre échantillon.

À ce sujet, comment NanoDrop calcule-t-il la concentration d'ADN ?

Vous multipliez la valeur de l'absorbance à 260 nm par un facteur fixe (c'est 50 pour ADN ) et vous obtenez le Concentration d'ADN . Voila. (Ok c'est techniquement le A260 d'un échantillon de 10 mm d'épaisseur qui est multiplié par 50; le NanoDrop exprime A260 comme si l'échantillon avait une épaisseur de 10 mm, comme dans une cuvette standard).

Pourquoi avons-nous dû utiliser un spectrophotomètre pour quantifier notre ADN ?

UNE le spectrophotomètre est capable de déterminer les concentrations moyennes des acides nucléiques ADN ou ARN présents dans un mélange, ainsi que leur pureté. À l'aide de la loi Beer-Lambert il est possible de relier la quantité de lumière absorbée à la concentration de la molécule absorbante.

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