Combien coûte la transformation d'une ligature ?
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Vidéo: Combien coûte la transformation d'une ligature ?

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Vidéo: 22 mois de bagues en 2 minutes - Appareil-dentaire.info 2024, Novembre
Anonim

Transformation . Ajouter entre 1-5 µl de ligature mélange aux cellules compétentes pour transformation . Élargi ligature avec PEG provoque une baisse de transformation efficacité (rapide Ligature Trousse). L'électroporation est recommandée pour les grandes constructions (> 10 000 pb).

De quelle quantité de produit de ligature ai-je besoin pour la transformation ?

Transformation . Ajouter entre 1-5 µl de ligature mélange aux cellules compétentes pour transformation . Élargi ligature avec le PEG provoque une baisse de transformation efficacité (rapide Ligature Trousse). L'électroporation est recommandée pour les grandes constructions (> 10 000 pb).

Par la suite, la question est, qu'est-ce que la ligature et la transformation ? Dans une expérience de clonage typique, les chercheurs insèrent d'abord un morceau d'ADN, tel qu'un gène, dans un morceau d'ADN circulaire appelé plasmide. Cette étape utilise des enzymes de restriction et de l'ADN ligase et est appelée une ligature . Après un ligature , l'étape suivante consiste à transférer l'ADN dans les bactéries dans un processus appelé transformation.

Par la suite, on peut aussi se demander, combien d'ADN est nécessaire pour une ligature ?

La concentration globale du vecteur + insert doit être comprise entre 1 et 10 g/ml pour une efficacité ligature . Des rapports molaires Vector:Insert compris entre 1:1 et 1:10 sont recommandés (1:3 est typique). Si vous n'êtes pas sûr de votre ADN concentrations, effectuer plusieurs ligatures avec des ratios variables.

Combien de temps peut-on conserver une réaction de ligature ?

Les ligatures peuvent se faire à température ambiante ou plus frais (pensez 12-16°C) pendant la nuit ou même pendant quelques jours, Si vous êtes vraiment occupé. Vous pouvez aussi stocker une ligature au réfrigérateur et le sortir plus tard pour continuer à ligaturer à température ambiante pendant aussi longue le cas échéant.

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