Pourquoi le spectrophotomètre doit-il être réglé sur une longueur d'onde particulière ?
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Vidéo: Pourquoi le spectrophotomètre doit-il être réglé sur une longueur d'onde particulière ?

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Vidéo: ABSORBANCE- Spectrophotomètre - Comment sélectionner la longueur d'onde de travail | Lycée | Chimie 2024, Novembre
Anonim

Lorsque vous réglez le longueur d'onde sur un spectrophotomètre , tu sommes changer la position du prisme ou du réseau de diffraction de sorte que différents longueurs d'onde de la lumière sommes dirigé vers la fente. Plus la largeur de la fente est petite, meilleure est la capacité de l'instrument à résoudre divers composés.

De celui-ci, à quelle longueur d'onde le spectrophotomètre sera-t-il réglé ?

Selon la gamme de longueur d'onde de la source lumineuse, elle peut être classée en deux types différents: Spectrophotomètre UV-visible: utilise la lumière sur la gamme ultraviolette (185 - 400 nm) et la gamme visible (400 - 700 nm ) du spectre de rayonnement électromagnétique.

De même, pourquoi avez-vous besoin d'étalonner le spectromètre à chaque fois que vous changez de longueur d'onde ? Spectrophotomètre doit être calibré contre une solution vierge donc cette mesures après avoir utilisé l'absorbance de la solution à blanc comme référence zéro. Une mesure de la capacité d'une substance à absorber la lumière d'un certain longueur d'onde.

à quelle longueur d'onde faut-il faire les lectures ?

Prendre lectures à 5 nm d'intervalle un peu avant et après cela longueur d'onde . Par exemple, si l'absorbance maximale a été trouvée à 450 nm, alors pour obtenir une image plus précise en train de lire de max, prendre l'absorbance lectures à 440, 445, 455 et 460 nm.

Pourquoi mesurer l'absorbance de la solution à 550 nm ?

Les protéines réagissent avec les ions de cuivre en alcalin Solution pour former un complexe de couleur violette qui absorbe la lumière à 550 nm . Par conséquent, par mesure la concentration du complexe, en utilisant A550 ( Absorbant à 550 nm ), tu sont également mesure la concentration de protéines.

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